上海昌吉在本文介紹了可以調節染色溫度和時間的恒溫水浴箱,觀察恒溫水浴加熱法對結核桿菌抗酸染色效果的影響,因為傳統的抗酸染色法是結核桿菌細菌學檢查方法。經典的妻—尼氏抗酸染色法操作過程較復雜,存在以下缺點:酒精燈加熱時間長,難以掌握染料用量,染料容易溢出玻片,沾污實驗臺或地面;加熱時染液容易干涸,須不斷補加染料;染色在開放環境進行,容易造成結核桿菌播散污染環境。現將結果報道如下。
1恒溫水浴加熱法抗酸染色
將固定后的模擬痰標本玻片放入自制恒溫水浴箱的托盤內,滴加石炭酸復紅染液,蓋上托盤蓋;開啟恒溫水浴箱電源開關,調節溫度旋鈕(設定50、60、70、80℃)和定時旋鈕(設定5min或10min);溫度達到設定溫度后,儀器開始自動計時,到達設定時間后儀器報警器鈴響,關閉電源開關,取出玻片,加酸性酒精脫色1min,流水沖洗后美藍復染30s,干燥后用顯微鏡油鏡觀察細菌染色性和形態。
2 結果
采用恒溫水浴箱加熱法對結核桿菌進行抗酸染色,染色時間為10min,染色溫度分別為50、60、70℃和80℃,染色結果見圖1。圖1結果顯示,70℃恒溫水浴染色(圖1-C)效果良好,菌體形態清晰,色澤明亮;60℃恒溫水浴染色(圖1-B)效果一般,菌體形態可辨,色澤偏暗;50℃和80℃恒溫水浴染色(圖1-A和D)效果差,可辨別的菌體較少,色澤淡染。
圖1 不同溫度下結核桿菌抗酸染色結果
3 討論
近年來,全球結核疫情明顯回升,結核病已成為了全球關注的公共衛生與社會問題[3],結核桿菌的細菌學檢查愈加重要。結核桿菌對酸堿有較強的抵抗力,一般染料難以進入菌體,故結核桿菌著色困難。在染色過程中進行一定程度的加熱處理,可以協助染料進入菌體。傳統加熱方法采用酒精燈火焰加熱,火焰溫度過高,溫度難以控制且加溫過程不穩定,染液易在玻片上干涸。本文使用恒溫水浴箱加熱法對結核桿菌進行抗酸染色效果觀察,結果表明:恒溫水浴加熱溫度70℃、染色10min時,結核桿菌染色陽性率高,染色鮮艷,對比度好,背景清晰。恒溫水浴加熱溫度50℃、染色10min時,菌體染色效果不明顯,可能是由于結核桿菌菌體含有大量脂質,在較低溫度條件下染料無法進入菌體細胞內。恒溫水浴加熱溫度為80℃、染色10min時,染色效果不明顯,可能是由于溫度過高造成菌體結構被破壞。本文建立的恒溫水浴箱加熱法,一方面克服了傳統妻—尼氏抗酸染色法的弊端,另一方面還能同時對多份標本涂片進行染色,明顯提高工作效率。總之,恒溫水浴箱加熱抗酸染色法具有染色穩定性好、安全、環保、清潔等優點,值得推廣應用。
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